تبلیغات
دانشجویان ارشد90بیماری شناسی گیاهی دانشگاه ولی عصر(عج) - انواع محیط کشت
 
درباره وبلاگ


امیدواریم مطالب این وبلاگ مورد استفاده شما عزیزان قرار بگیرد.

مدیر وبلاگ : امین سجاد
جستجو

آمار وبلاگ
  • کل بازدید :
  • بازدید امروز :
  • بازدید دیروز :
  • بازدید این ماه :
  • بازدید ماه قبل :
  • تعداد نویسندگان :
  • تعداد کل پست ها :
  • آخرین بازدید :
  • آخرین بروز رسانی :
77
دانشجویان ارشد90بیماری شناسی گیاهی دانشگاه ولی عصر(عج)
خورشید به گیاهی حرارت می دهد که سر از خاک بیرون آورده باشد.




محیط های کشت

کشت وتکثیر باکتریها در محیط های مصنوعی از مهمترین روشهای تشخیصی در باکتر ی شناسی است . برای کشت موفق باید شرایط مناسب برای رشد باکتری فراهم گردد. ازجمله این شرایط مواد غذایی- حرارت-رطوبت کافی- نمک- PH مناسب- حضور یاعدم حضوراکسیژن می باشد. محیط های كشت را متناسب با نوع آزمایش می‏توان به دو صورت مایع و جامد تهیه كرد.   

منبع:http://microbiology1.blogfa.com 

محیط های کشت
کشت وتکثیر باکتریها در محیط های مصنوعی از مهمترین روشهای تشخیصی در باکتر ی شناسی است . برای کشت موفق باید شرایط مناسب برای رشد باکتری فراهم گردد. ازجمله این شرایط مواد غذایی- حرارت-رطوبت کافی- نمک- PH مناسب- حضور یاعدم حضوراکسیژن می باشد. محیط های كشت را متناسب با نوع آزمایش می‏توان به دو صورت مایع و جامد تهیه كرد.


۱- محیط كشت مایع :
محیط های مایع به علت نداشتن آگار در تركیب خود به صورت جامد در نیامده و متناسب با نوع میكروارگانیسم و آزمایشهای مورد نظر می‏توان آنها را در لوله‏های آزمایش ـ ارلن مایر و یا ظروف دیگر مورد استفاده قرار داد.
۲.محیط كشت جامد :
محیط های جامد به علت دارا بودن آگاردر تركیب خود به صورت جامد بوده و متناسب با میكروارگانیسم ها و آزمایش های مورد نظر می‏توان آنها را در لوله - ظروف پتری(پلیت)و یا ظروف دیگر مورد استفاده قرار داد . البته محیط های نیمه جامد نیز وجود دارد.که میزان آگار آن نسبت به محیط های جامد کمتر است.مثل SIM
كشت های جامد در لوله را می‏توان به صورتهای زیر تهیه كرد :
۱. کشت های عمقی Stab Cultures :
حدود 5 الی 10 میلی لیتر از محیط كشت را در لوله آزمایش ریخته و به طور عمودی می‏گذارند تا محیط بسته شود. سپس میكروارگانیسمها را توسط سوزن كشت(آنس) به طور عمقی در مركزاین محیط كشت می‏دهند .

۲.كشت در داخل محیط جامد Shake Cultures:

به لوله‏های آزمایش محتوی محیط كشت جامد پس از ذوب شدن كه تا 45 درجه سلسیوس سرد شده است. باكتری مورد نظر را افزوده و لوله را بین دستها تكان می‏دهندتا باكتریها كاملا با محیط كشت مخلوط شوند , سپس لوله آزمایش را به طور عمودی قرار می‏دهند تا محیط بسته شود .

۳. كشت شیب دار Slant Cultures:

حدود 5 میلی لیتر از محیط كشت جامد (ذوب شده) در لوله آزمایش و یا لوله‏های كوچك دیگر ریخته می‏شود و پس از سترون كردن آنها را به صورت كج به گونه‏ای می‏خوابانند كه سطح محیط كشت شیب دار باشد .

میكروارگانیسمها را با سوزن كشت(آنس) در عمق و سطح و یا به وسیله فیلدوپلاتین نوك حلقه‏ای ( لوپ ) در سطح شیب دار كشت می‏دهند.

كشت جامد در پلیت به سه صورت انجام می‏گیرد :

۱.كشت خطی در سطح محیط های جامد در ظرف پتری:

با این روش می‏توان میكروارگانیسم را بطور خطی توسط فیلدوپلاتین نوك حلقه‏ای (لوپ) در سطح محیط جامد كشت داد.
۲. كشت در سطح محیط :
در این روش توسط پی پت مقداری از رقت معینی از میكروارگانیسم را در سطح محیط جامد ریخته و با میله پخش كننده , كاملا در سطح محیط می‏گسترانند .
۳. كشت های دو لایه :
در این روش كشت مایع باكتری (سوسپانسیون باكتری) به محیط كشت ذوب شده (حرارت 45 درجه سلسیوس ) افزوده می‏شود. در صورت لزوم باكتری را با لایه نازكی از همان محیط كشت می‏پوشانند و پس از بسته شدن محیط ظرفهای پتری را به طور واژگون در گرمخانه قرار می‏دهند تا از ریختن قطرات آب درسطح محیط جلوگیری گردد .
انواع محیط های كشت:
محیط های كشت را از نظر تركیب شیمیایی و دارا بودن مواد غذائی یا مواد باز دارنده می‏توان به چند دسته تقسیم كرد .
۱. محیط كشت انتخابی (Selective) :
این محیط ها برای جدا كردن یك یا دسته‏ای از میكروارگانیسم‏ها بكار می‏روند و به علت دارا بودن مواد بازدارنده، از رشد میكروارگانیسم‏های ناخواسته جلوگیری می‏كنند مانند محیط برد باركر جهت جدا كردن استافیلوكوكوس اورئوس و یا محیط S.S برای سالمونلا و شیگلا و یا محیط دارای نمک های صفراوی برای جدا كردن كلی فرمها .
2.محیط های كشت غنی كننده (Enrichment) :
این محیط ها معمولا در مواردی به كار می‏روند كه تعداد میكروارگانیسم مورد جستجو درنمونه غذائی كم بوده و یا به علت وجود زیاد میكروارگانیسم‏های دیگر جدا كردن آن با اشكال مواجه باشد.این محیط ها با تركیب خاص خود از نظر pH و مواد غذائی امكان رشد برای میكروارگانیسم مورد نظر را فراهم می‏كند،مانند محیط گوشت پخته برای جدا كردن استافیلوكوكوس اورئوس .

۳.محیط های كشت افتراقی (Differential) :

محیط هایی هستند كه میكروارگانیسم‏های مختلف در آن ویژگیهای خاص خود را نشان می‏دهند , مانند محیط های خون دار كه در آن نمونه‏های همولیتیك و غیر همولیتیك از هم جدا می‏شوند .و محیط مك كانكی آگار كه در آن كلی فرمهای تخمیر كننده لاكتوز پرگنه‏های قرمز می‏دهند . در حالی كه باكتریهای روده‏ای كه قادر به تخمیر لاكتوز نیستند مانند سالمونلا پرگنه‏های بی رنگ به وجود می‏آورند .



معرفی برخی از محیط های کشت مورد استفاده:
1. Blood agar
محیط کشت آگار خوندار یکی از محیط های کشت مغذی است که رشدبسیاری ازباکتری ها راتامین می کند وهمچنین ایجاد همولیز برروی این محیط به راحتی قابل بررسی است. برای تهیه این محیط پس ازتهیه آگار پایه لازم است محیط چهل تا پنجاه درجه سانتیگراد خنک شود. دراین مرحله پنج میلی لیتر خون تازه به ازای هرصد میلی لیتر محیط افزوده وپس از مخلوط کردن درپلیت های استریل تقسیم کنید.در این محیط برخی دارای همولیز آلفا(ناقص)و برخی بتا(کامل) و برخی گاما(فاقد همولیز)میباشند .نوع همولیز استاف اورئوس بتا میباشد یعنی همولیز کامل.این محیط محیط مناسبی برای هموفیلوس ها نیز می باشد

. E.M.B
ائوزین متیلن بلو آگار نوعی محیط کشتی است كه برای تشخیص و جداسازی باكتری های میله ای روده ای گرم منفی استفاده می شود. همچنین ائوزین متیلن بلو آگار مانع از رشد باكتری های گرم مثبت می شود.ولی برخی گرم مثبت ها مانند استافیلوکوک های گواگولاز مثبت و برخی مخمر ها (کاندیدا آلبیکنس) می توانند در این محیط رشد کنند. مبنای افتراق در این محیط بكارگیری دو رنگ شاخص یعنی ائوزین و متیلن بلواست كه متمایزكننده تخمیركننده های لاكتوز ازارگانیسمهای فاقد توانایی تخمیر لاكتوز می باشد. در این محیط باكتری های تخمیر كننده لاكتوز دارای كلنی هایی قرمز پر رنگ و ارغوانی تا بنفش خواهند بود در حالیكه ارگانیسم هایی كه نمی توانند لاكتوز را تخمیركنند كلنی های كاملا بی رنگ یا هم رنگ محیط خواهند داشت.E.coliدر این محیط جلای سبز فلزی خواهد داشت.

.Hekton Enteric agar
هكتون انتریك آگار محیطی انتخابی برای جداسازی و ترمیم نمونه های مدفوعی متعلق به باكتری های روده ای به ویژه سالمونلا و شیگلا است. این محیط باكتری های تخمیركننده لاكتوز را از آنهایی كه نمی توانند از تخمیر لاكتوز ، اسید تولید كنند با ایجاد رنگ زرد - نارنجی روی محیط مناسب در حضور شاخص pH متمایز می كند . باكتری هایی كه لاكتوز راتخمیر نمی كنند، روی محیط تغییر رنگ ایجاد نمی دهند. هكتون انتریك آگارمی تواند تولید گاز هیدروژن سولفید را با تیره نمودن بخش هایی از محیط نشان دهد.

. Mackonkey agar
مك كانكی آگار محیطی جامد برای متمایز كردن جمعیت زیادی ازمیكروبها است.این محیط اهمیت كاربردی زیادی در شناسایی تخمیركننده های لاكتوز، پاتوژن های روده ای گرم منفی دارد.این محیط شامل پپتون, بافر,لاکتوز,کریستال ویوله,املاح صفرابی و معرف نوترال رد است که مانع رشد باكتریهای گرم مثبت می شود. كلنی باكتری های تخمیركننده لاكتوز،محیط را به رنگ قرمز درمی آورند.رنگ قرمز درنتیجه ایجاد محیط اسیدی بوسیله تخمیر كننده های لاكتوز شكل می گیرد.ارگانیسم هایی كه نمی توانند لاكتوز را تخمیر كنند، سبب تغییر رنگ نمی شوند.در واقع همرنگ با محیط می شوند.
5.Mannitol salt agar
یك محیط انتخابی برای تمایز استافیلوكوكهای پاتوژن مانیتول سالت آگار است. غلظت بالای نمك(7.5%) در این محیط مانع از رشد بیشتر میكروارگانیسمها می شود.نه تنهااستافیلوكوك های پاتوژن می توانند در این محیط رشد كنند بلكه آنها در این محیط اسید هم تولید می كنند.این اسید تولید شده به عنوان شاخصpH موجب تغییر رنگ محیط از قرمز به زرد می شود. استافیلوكوك های غیر باتوژن نیز قادر به رشد در این محیط هستند ولی نمی توانند اسید تولید كرده رنگ آن را تغییر دهند.

محیط های کشت تنوع بسیار زیادی دارند که تنها به چند مورد از آنها در این بخش اشاره شد.

خصوصیات برخی از محیطهای مصنوعی كه به طور معمول مورد استفاده قرار می‌گیرد.

الف) باكتروئیدس بایل اسكولین آگار (BBE)

BBE آگار جهت جداسازی سریع و شناسائی احتمالی گروه باكتروئیدس فراجیلیس مفید می‌باشد.

این محیط دارای mg/ml100 جنتامایسین، كه رشد بیشتر ارگانیسم‌های هوازی را مهار می‌كند، 20% صفرا، كه رشد اغلب بیهوازیها را مهار می‌كند (به جز باكتروئیدس فراجیلیس و تعداد كمی از سایر گروهها) و اسكولین، كه به تشخیص گروه باكتروئیدس فراجیلیس كه معمولاً اسكولین مثبت هستند كمك می‌كند، می‌باشد.



ب) آگار خوندار

این محیط از یك پایه مانند تریپتون كه منشاء پروتئینی دارد، هضم شده پروتئینی سویا (كه دارای مقدار كمی از كربوهیدراتهای طبیعی است)، كلرید سدیم، آگار و 5 درصد خون تشكیل شده است.



ج) محیط BHI

محیط غنی از مواد مغذی دیگر محیط BHI می‌باشد، كه جهت رشد بسیاری از میكروارگانیسم‌ها می‌توان از آن استفاده نمود. این محیط را می‌توان به صورت آبگوشت (BHI Broth) یا سخت شده بوسیله آگار (BHI agar)، با یا بدون اضافه كردن خون مورد استفاده قرار داد.



د) شكلات آگار

در ساختن این محیط از پایه آگار خوندار استفاده می‌شود. پس از آماده نمودن و استریل كردن محیط پایه گلبولهای قرمز را هنگامی كه هنوز محیط داغ است (در حدود 85 درجه سانتیگراد) به آن اضافه می‌كنیم. گلبولهای قرمز در این حالت لیز شده و محیط رنگ شكلاتی – قهوه ای به خود می‌گیرد. اكنون هموگلوبین و سایر مواد مغذی موجود در گلبولهای قرمز در محیط وجود دارند. هِمین (hemin) كه فاكتور X خوانده می‌شود، و كوآنزیم نیكوتین آدنین دی نوكلئوئید (NAD) كه فاكتور V خوانده می‌شود، به عنوان مكمل به محیط پایه آگار غنی از مواد مغذی اضافه می‌گردند. نایسریا گنوره و گونه‌های هموفیلوس در میان سایر ارگانیسم‌های سخت رشد، رشد بهتری در حضور مواد مغذی مكمل اضافه شده به شكلات آگار دارند.

هـ) Chopped meat broth

این محیط با یا بدون اضافه كردن گلوكز، جهت غنی سازی و محافظت از رشد ارگانیسم‌های بیهوازی مورد استفاده قرار می‌گیرد. تكه‌های گوشت سوبستراهای خوبی جهت آنزیم‌های پروتئولیتیك بوده و به عنوان یك عامل احیاء كننده جهت حفظ پتانسیل پایین اكسیداسیون – احیا عمل می‌كند.



و) كلمبیا CAN آگار با خون

محیط پایه كلمبیا آگار یك محیط غنی از مواد مغذی بوده و دارای سه منبع پپتون می‌باشد. اضافه كردن 5 درصد خون دفیبرینه محیط را مغذی نموده و واكنشهای همولیتیك را به خوبی نشان می‌دهد. عوامل ضد باكتری كولیستین (10 میكروگرم در میلی لیتر) و نالیدیكسیك اسید (15 میكروگرم در میلی لیتر) به طور كامل رشد انتروباكتریاسه‌ها و گونه‌های سودوموناس را مهار كرده، در صورتیكه استافیلوكوك استرپتوكوك و انتروكوك به راحتی رشد می‌كنند، برخی از ارگانیسم‌های گرم – منفی مانند گاردنرلا واژینالیس و برخی از گونه‌های باكتروئیدس می‌توانند بر روی محیط كلمبیا آگار با CAN و خون به خوبی رشد نمایند.



ز) آبگوشت گرم – منفی

آبگوشت گرم – منفی (GN broth) یك محیط انتخابی بوده و جهت كشت سالمونلا و شیگلا از نمونه‌های مدفوع و سواب ركتوم مورد استفاده قرار می‌گیرد. آبگوشت GN دارای چند تركیب فعال می‌باشد. ستیرات سدیم، به عنوان منبع كربن، دزوكسی كولات سدیم (یك نمك صفراوی) ارگانیسم‌های گرم – منفی را تخریب نموده و از رشد اولیه كلی فرمها ممانعت به عمل می‌آورد. اضافه نمودن مانیتول با غلظتی بیشتر از دكستروز رشد پاتوژنهای تخمیر كننده مانیتول را تقویت نموده و رشد گونه‌های پروتئوس را تضعیف می‌كند. محیط جهت حفظ pH طبیعی، حتی بعد از تولید متابولیت‌های اسید بوسیله باكتریها، با فره شده است.



ح) هكتون اینتریك آگار (HE)

این محیط یك نمونه از محیطهای آگار انتخابی – افتراقی است كه جهت استریلیزاسیون احتیاجی به اتوكلاو كردن ندارد. غلظت نمك‌های صفراوی و رنگ‌های بروموتیمول بلووفوشین اسیدی به اندازه كافی جهت ممانعت از رشد بیشتر فلور طبیعی مدفوع بالاست. این محیط فقط اندكی از رشد گونه‌های سالمونلا و شیگلا ممانعت به عمل می‌آورد. به دلیل آنكه تعداد معدودی از ارگانیسم‌ها قادر به رشد بر روی این محیط هستند، قبل از تقسیم كردن در پلیت احتیاج به اتوكلاو كردن ندارد. ارگانیسم‌های تخمیر كننده لاكتوز (لاكتوز-مثبت) با پایین آوردن pH محیط در محیط اطراف كلنی، كلنی‌ها را زرد رنگ می‌كنند، اضافه كردن فر یك آمونیوم سیترات، منبع آهن در بسیاری از محیط‌های كشت، موجب تولید H2S از تیوسولفات سدیم شده و با تشكیل یك رسوب سیاه رنگ در اطراف كلنی تولید H2S را مشخص می‌كند.



ط) Kanamycin-Vancomycin Laked rabbit blood agar KVLB

آگار یك محیط كشت انتخابی جهت جداسازی گونه‌های باكتروئیدس می‌باشد این محیط حاوی 75 میكروگرم در میلی لیتر كانامایسین است.



ی) لونشتین – جانسون

برای جدا سازی میکروب سل از آن استفاده میکنیم



ك) مك كانكی آگار (Mac conkey agar)

مك كانكی آگار معمولترین محیط كشت آگار انتخابی – افتراقی بوده و دارای رنگ كریستال ویوله جهت ممانعت از رشد باكتریهای گرم – مثبت و اندیكاتور pH قرمز خنثی (Neutral red) جهت نشان دادن خصوصیات افتراقی می‌باشد. باسیل‌های گرم منفی به آسانی بر روی این محیط رشد نموده و باكتریهای تخمیر كننده لاكتوز، محصولات اسیدی تولید نموده كه سبب كاهش pH در محیط اطراف كلنی می‌گردد. اندیكاتور قرمز خنثی در pH اسیدی قرمز رنگ می‌شود. پس ارگانیسم‌های لاكتوز – مثبت قرمز رنگ و لاكتوز – منفی بی‌رنگ و شفاف هستند. مك كانكی آگار محیط انتخابی و افتراقی مورد استفاده جهت گونه‌های شیگلا می‌باشد.



ل) میدل بروك آگار و براث Middlebrook agar and broth

اطلاعات خاصی در مورد این محیط کشت ندارم



م) فنیل اتیل الكل آگار (PE agar)

با اضافه نمودن فنیل اتیل الكل به یك پپتون و محیط پایه عصاره گوشت (beef extract) آگاری ایجاد می‌شود كه از رشد باكتریهای گرم – منفی جلوگیری می‌كند. اضافه كردن 5 درصد خون گوسفند مواد مغذی لازم جهت رشد استافیلوكوكها را فراهم می‌آورد. این محیط همچنین جهت كشت ارگانیسم‌های گرم – منفی كه الكل رشدشان را متوقف نمی‌كند، مورد استفاده قرار می‌گیرد. پس از آماده كردن پلیت‌های فنیل اتیل الكل آگار از آن بوی گل رز به مشام می‌رسد.



ن) PPLO agar (قبلاً Pleuro pneumonia – Like organism یا PPLO نامیده می‌شد)

یك محیط غنی شده است كه جهت میكوپلاسماها مورد استفاده قرار می‌گیرد. آگار این محیط نسبت به سایر محیط‌های باكتریولوژی كمتر بوده و در pH اندكی بالاتر تهیه می‌شود. Beef heart in fusion، پپتون و اضافه كردن مواد مغذی مانند سرم و مایع آسیت به میكوپلاسماها امكان رشد داده و كلنی‌هائی با اندازه كوچك و مركز متراكم بر روی این محیط ایجاد می‌كنند. پنی‌سیلین و كریستال ویوله را می‌توان جهت جلوگیری از رشد باكتریهای آلوده كننده به این محیط اضافه نمود.



ص) سابورودكستروز آگار

جهت كشت قارچهای پاتوژن مورد بهره‌برداری قرار گرفته و خصوصاً جهت كشت عوامل قارچی سطح پوست مفید است. اضافه نمودن عوامل ضد میكروبی سیكلوهگزامید (5/0 میكروگرم در میلی لیتر) و كلرامفنیكل (16 میكروگرم در میلی لیتر).



ع) آگار انتخابی استرپتوكوك

این محیط، تغییر یافته محیط آگار خوندار بوده و حاوی كریستال ویوله، تری‌متوپریم-سولفامتوكسازول و كولیستین با غلظت مناسب جهت ممانعت از رشد اغلب استرپتوكوكها به غیر از استرپتوكوك پیوژنزو استرپتوكوك آگالاكیته می‌باشد. همولیز بتا بروی این محیط به آسانی قابل مشاهده است. این محیط جهت كشت اولیه سواب گلو جهت تشخیص استرپتوكوك گروه A بسیار مفید است.



ف) تایر – مارتین آگار

این محیط همان محیط شكلات آگار تغییر یافته است و جهت كشت نایسریاهای پاتوژن به كار می‌رود. آنتی‌بیوتیك‌هائی مانند كولیستین (جهت ممانعت از رشد سایر باكتریهای گرم – منفی)، وانكومایسین (جهت ممانعت از رشد باكتریهای گرم – مثبت) و نیستاتین یا انیزومایسین (جهت ممانعت از رشد مخمرها) به محیط اضافه می‌شود. در تایر مارتین آگار از نیستاتین جهت ممانعت از رشد مخمرها استفاده می‌شود. محیط تغییر یافته تایر – مارتین (MTM) دارای تری متوپریم جهت ممانعت از رشد پروتئوس می‌باشد.



س) تیوگلیكولات براث

این آبگوشت غنی كننده به طور معمول در آزمایشگاههای میكروبشناسی مورد استفاده قرار می‌گیرد. مقدار آگار موجود در محیط تیوگلیكولات 075/0 درصد بوده و این مقدار آگار جهت جلوگیری از ورود جریان اتمسفر حاوی اكسیژن به داخل آبگوشت استفاده شده است. تیوگلیكولیك اسید به عنوان یك عامل احیاء كننده جهت پایین آوردن پتانسیل اكسیداسیون احیاء در محیط استفاده شده است. با اضافه نمودن تعداد زیادی از فاكتورهای مغذی مانند كازئین – عصاره مخمر، گوشت، و ویتامین‌ها و غیره به این محیط، رشد اكثر باكتریهای پاتوژن تشدید می‌گردد. سایر مكمل‌های غذایی، اندیكاتور اكسیداسیون-احیاء (Resazorin)، دكستروز، ویتامین K1 و هِمین (hemin) در فرمولهای تغییر یافته دیگر به محیط اضافه شده است. تكنولوژیست‌ها در این محیط می‌توانند تفاوت بین انتشار باكتریها در محیط را مشاهده نمایند. باسیل‌های گرم-منفی اختیاری در سراسری محیط پخش می‌شوند، كوكسی‌های گرم – مثبت به صورت توپ باد كرده (puff ball) رشد می‌كنند و هوازیهای مطلق مانند سودوموناس و مخمرها به صورت یك لایه نازك در سطح آگار رشد می‌نمایند. جهت رشد باكتریهای بیهوازی اگر به محیط تیوگلیكولات مكمل هِمین (hemin) به مقدار 5 میكروگرم در میلی لیتر و ویتامین K1 به میزان 1/0 میكروگرم در میلی لیتر و بیكربنات سدیم به میزان 1 میلی گرم در میلی لیتر اضافه گردد نتایج بهتری حاصل می‌گردد.



ق) محیط تریكوموناس

جهت جداسازی تك یاخته‌ها مورد استفاده قرار گرفته است. این محیط دارای آنتی بیوتیك كرامفنیكل جهت ممانعت از رشد باكتریهای آلوده كننده می‌باشد. pH حدود 6 است



ر) گزیلوز – لیزین – دزوكسی كولات آگار (XLD)

XLD آگار مانند هكتون اینتریك آگار یك محیط انتخابی جهت رشد شیگلا و سالمونلا بوده و احتیاجی به استریلیزاسیون توسط اتوكلاو ندارد. نمك‌های صفراوی از رشد بسیاری از انتروباكتریاسه‌ها و كوكسی‌های گرم-مثبت ممانعت به عمل می‌آورند. اندیكاتور فنل رد جهت تمایز باكتریهای لاكتوز-منفی (سالمونلا و شیگلا) كه كلنی آنها به صورت بی‌رنگ یا صورتی كم رنگ در می‌آید به محیط اضافه شده است. فریك آمونیوم ستیرات جهت مشاهده تولید H2S توسط ارگانیسم‌های H2S – مثبت به محیط اضافه شده است. در صورت تولید H2S مركز كلنی تیره می‌گردد. ارگانیسم‌هائی كه كربوهیدراتهای موجود در محیط را تخمیر می‌كنند (گزیلوز لاكتوز و سوكروز) كلنی‌های زرد رنگ تولید می‌كنند.

محیط کشت میکروب ها




کشت وتکثیر باکتریها در محیط های مصنوعی از مهمترین روشهای تشخیصی در باکتر ی شناسی است . برای کشت موفق باید شرایط مناسب برای رشد باکتری فراهم گردد. ازجمله این شرایط مواد غذایی- حرارت-رطوبت کافی- نمک- PH مناسب- حضور یاعدم حضوراکسیژن می باشد. محیط های كشت را متناسب با نوع آزمایش می‏توان به دو صورت مایع و جامد تهیه كرد.


۱- محیط كشت مایع :

محیط های مایع به علت نداشتن آگار در تركیب خود به صورت جامد در نیامده و متناسب با نوع میكروارگانیسم و آزمایشهای مورد نظر می‏توان آنها را در لوله‏های آزمایش ـ ارلن مایر و یا ظروف دیگر مورد استفاده قرار داد.

۲.محیط كشت جامد :

محیط های جامد به علت دارا بودن آگاردر تركیب خود به صورت جامد بوده و متناسب با میكروارگانیسم ها و آزمایش های مورد نظر می‏توان آنها را در لوله - ظروف پتری(پلیت)و یا ظروف دیگر مورد استفاده قرار داد . البته محیط های نیمه جامد نیز وجود دارد.که میزان آگار آن نسبت به محیط های جامد کمتر است.مثل SIM

كشت های جامد در لوله را می‏توان به صورتهای زیر تهیه كرد :

۱. کشت های عمقی Stab Cultures :

حدود 5 الی 10 میلی لیتر از محیط كشت را در لوله آزمایش ریخته و به طور عمودی می‏گذارند تا محیط بسته شود. سپس میكروارگانیسمها را توسط سوزن كشت(آنس) به طور عمقی در مركزاین محیط كشت می‏دهند .

۲.كشت در داخل محیط جامد Shake Cultures:

به لوله‏های آزمایش محتوی محیط كشت جامد پس از ذوب شدن كه تا 45 درجه سلسیوس سرد شده است. باكتری مورد نظر را افزوده و لوله را بین دستها تكان می‏دهندتا باكتریها كاملا با محیط كشت مخلوط شوند , سپس لوله آزمایش را به طور عمودی قرار می‏دهند تا محیط بسته شود .

۳. كشت شیب دار Slant Cultures:

حدود 5 میلی لیتر از محیط كشت جامد (ذوب شده) در لوله آزمایش و یا لوله‏های كوچك دیگر ریخته می‏شود و پس از سترون كردن آنها را به صورت كج به گونه‏ای می‏خوابانند كه سطح محیط كشت شیب دار باشد .

میكروارگانیسمها را با سوزن كشت(آنس) در عمق و سطح و یا به وسیله فیلدوپلاتین نوك حلقه‏ای ( لوپ ) در سطح شیب دار كشت می‏دهند.

كشت جامد در پلیت به سه صورت انجام می‏گیرد :

۱.كشت خطی در سطح محیط های جامد در ظرف پتری:

با این روش می‏توان میكروارگانیسم را بطور خطی توسط فیلدوپلاتین نوك حلقه‏ای (لوپ) در سطح محیط جامد كشت داد.

۲. كشت در سطح محیط :

در این روش توسط پی پت مقداری از رقت معینی از میكروارگانیسم را در سطح محیط جامد ریخته و با میله پخش كننده , كاملا در سطح محیط می‏گسترانند .

۳. كشت های دو لایه :

در این روش كشت مایع باكتری (سوسپانسیون باكتری) به محیط كشت ذوب شده (حرارت 45 درجه سلسیوس ) افزوده می‏شود. در صورت لزوم باكتری را با لایه نازكی از همان محیط كشت می‏پوشانند و پس از بسته شدن محیط ظرفهای پتری را به طور واژگون در گرمخانه قرار می‏دهند تا از ریختن قطرات آب درسطح محیط جلوگیری گردد .

انواع محیط های كشت:

محیط های كشت را از نظر تركیب شیمیایی و دارا بودن مواد غذائی یا مواد باز دارنده می‏توان به چند دسته تقسیم كرد .

۱. محیط كشت انتخابی (Selective) :

این محیط ها برای جدا كردن یك یا دسته‏ای از میكروارگانیسم‏ها بكار می‏روند و به علت دارا بودن مواد بازدارنده، از رشد میكروارگانیسم‏های ناخواسته جلوگیری می‏كنند مانند محیط برد باركر جهت جدا كردن استافیلوكوكوس اورئوس و یا محیط S.S برای سالمونلا و شیگلا و یا محیط دارای نمک های صفراوی برای جدا كردن كلی فرمها .

2.محیط های كشت غنی كننده (Enrichment) :

این محیط ها معمولا در مواردی به كار می‏روند كه تعداد میكروارگانیسم مورد جستجو درنمونه غذائی كم بوده و یا به علت وجود زیاد میكروارگانیسم‏های دیگر جدا كردن آن با اشكال مواجه باشد.این محیط ها با تركیب خاص خود از نظر pH و مواد غذائی امكان رشد برای میكروارگانیسم مورد نظر را فراهم می‏كند،مانند محیط گوشت پخته برای جدا كردن استافیلوكوكوس اورئوس .

۳.محیط های كشت افتراقی (Differential) :

محیط هایی هستند كه میكروارگانیسم‏های مختلف در آن ویژگیهای خاص خود را نشان می‏دهند , مانند محیط های خون دار كه در آن نمونه‏های همولیتیك و غیر همولیتیك از هم جدا می‏شوند .و محیط مك كانكی آگار كه در آن كلی فرمهای تخمیر كننده لاكتوز پرگنه‏های قرمز می‏دهند . در حالی كه باكتریهای روده‏ای كه قادر به تخمیر لاكتوز نیستند مانند سالمونلا پرگنه‏های بی رنگ به وجود می‏آورند .



     



نوع مطلب :
برچسب ها : محیط کشت، باکتری شناسی،
لینک های مرتبط :


یکشنبه 2 بهمن 1390 :: نویسنده : امین سجاد
نظرات ()
سه شنبه 1 اسفند 1391 12:14 ب.ظ
اگر ممکنه تعدادی از سوابق علمی دکتر خدایگان رو در سایت بذارید. بااحترام
امین سجادچشم به زودی سوابق تمامی اساتید در سایت اضافه خواهد شد
سه شنبه 1 اسفند 1391 12:10 ب.ظ
مایلم عضو شوم
امین سجادقربانت
 
لبخندناراحتچشمک
نیشخندبغلسوال
قلبخجالتزبان
ماچتعجبعصبانی
عینکشیطانگریه
خندهقهقههخداحافظ
سبزقهرهورا
دستگلتفکر